ARTIGOS ORIGINAIS
EXPRESSÃO CITOFOTOMÉTRICA DO MARCADOR CD-34 NO ADENOCARCINOMA DE CÓLON
CD-34 Cytophotometric Expression in Colon Adenocarcinoma
João Batista Monteiro Tajra1; Osvaldo MALAFAIA2; Jurandir Marcondes RIBAS-FILHO3; Nicolau Gregori CZECZKO4; Paulo Afonso Nunes NASSIF5; Marileide Inácio da SILVA6
1 Mestre pelo Programa de Pós-Graduação em Princípios da Cirurgia do Hospital Universitário Evangélico de Curitiba / Faculdade Evangélica do Paraná; 2 Livre Docente e Doutor em Cirurgia, Coordenador do Programa de Pós-Graduação em Princípios da Cirurgia do Hospital Universitário Evangélico de Curitiba / Faculdade Evangélica do Paraná; 3Mestre e Doutor em Cirurgia, Professor Adjunto da Faculdade Evangélica do Paraná; 4 Mestre e Doutor em Cirurgia, Professor Adjunto da Faculdade Evangélica do Paraná; 5 Mestre e Doutor em Cirurgia, Professor Adjunto da Faculdade Evangélica do Paraná; 6 Aluna do Programa de Pós-Graduação em Princípios da Cirurgia do Hospital Universitário Evangélico de Curitiba / Faculdade Evangélica do Paraná.
RESUMO: A angiogênese é uma das responsáveis pelo equilíbrio homeostático entre as células. Durante o desenvolvimento do processo de degeneração maligna celular o seu desequilíbrio é considerado um importante marco neoplásico e o CD-34 parece ser um bom marcador de angiogênese. Objetivos _ Avaliar qual a expressão citofotométrica do CD-34 no adenocarcinoma de cólon; se apresenta alterações nas diferentes fases evolutivas na classificação modificada de Dukes; e como se expressa no cólon direito e esquerdo. Métodos - Utilizaram-se 19 casos submetidos à técnica imunoistoquímica com anticorpo anti CD-34. Após, as lâminas foram lidas pelo sistema SAMBA com o software Immuno 4, analisando dois índices: marcação e densidade óptica. Os parâmetros foram marcação e expressão do marcador, quer individual quer relacionado à classificação de Dukes e lado. Resultados - A média do índice de marcação foi 66,54 e densidade óptica 43,60. Em relação à classificação de Dukes, 12 do tipo B, tiveram índice de marcação 67,95 e densidade óptica 43,21 e, para os sete do tipo C, índice de marcação 64,12 e densidade óptica 44,27. Não foi possível identificar diferença em relação à classificação de Dukes. Quanto ao lado do tumor, os 11 esquerdos tiveram índice de marcação 72,08 e densidade óptica 46,70, e os oito direitos, índice de marcação 58,93 e densidade óptica 39,44. Em relação ao índice de marcação houve diferença significante, mas quanto à densidade óptica não. Conclusões - O CD-34 apresentou expressão discreta como marcador de angiogênese; sem diferença entre tipos B e C de Dukes mostrando atividade angiogênica maior à direita do que à esquerda.
Descritores: Neoplasias do cólon, CD-34, Imunoistoquímica, Classificação de Dukes, Angiogênese.
INTRODUÇÃO
O adenocarcinoma de cólon é a segunda
causa mais comum de morte por câncer em homens
e mulheres, sendo responsável por mais de cinco
milhões de óbitos por ano. Na época de aparecimento
apenas 70% dos tumores são ressecáveis, sendo 75%
curáveis, entretanto 25% terão recorrência da doença
1.
Os pólipos colorretais podem dar origem
à neoplasia colorretal, o que determina a necessidade
de vigilância destas lesões através de estudos
genéticos de padrões de crescimento e degeneração da
mucosa colorretal. O reconhecimento dos mecanismos de
desenvolvimento das neoplasias transcorre por
alteração entre a taxa proliferativa nas criptas e a de morte
por apoptose, sendo necessária modificação genética
em ambas para o crescimento tumoral. A inabilidade
da célula para submeter-se a morte celular programada
é um importante marcador da propensão a malignidade.
As alterações cromossômicas de cada
tumor tornaram-se passos decisivos para o correto
entendimento de seu aparecimento, sendo o acúmulo
destas modificações genéticas o fator decisivo para
o surgimento neoplásico. Várias alterações nos genes
e seus produtos centrais afetam as fases do
desenvolvimento celular, demonstrando o fenótipo molecular
da célula tumoral 2.
O prognóstico e o tratamento desta
doença estão ligados ao momento do diagnóstico,
invasão linfonodal, comprometimento local e disseminação
à distância. O avanço na eficácia do tratamento nos
últimos cinco anos se deve aos conhecimentos sobre
a tumorigênese dos tumores de cólon e reto
3.
A fase de crescimento e invasão tumoral
tem na angiogênese seu principal suporte somado às
características genéticas e fatores de crescimento
diferentes das do processo normal de reparação
4. Estes fatos tornam a densidade microvascular importante
para avaliação prognóstica. Ela pode ser estudada com
diversos marcadores, dentre eles uma glicoproteína
denominada CD-34 5.
Pode-se utilizar para esta finalidade, o
método padrão manual de coloração e leitura
imunoistoquímica. Apesar de amplamente utilizado, a subjetividade,
erros de coloração e dificuldade de comparação dos dados
a partir deste método, suscitaram na literatura
dúvidas metodológicas. O desenvolvimento de softwares
de forma progressiva facilitou as análises
comparativas dos diversos biomarcadores em relação às
neoplasias. O sistema de múltiplos parâmetros de
análise computadorizada de imagens, na atualidade, revelou
em vários estudos ser mais rápido, confiável e menos
passível de vieses, tornando as pesquisas de
melhor confiabilidade 6.
Os objetivos deste estudo foram: 1. avaliar qual é a expressão citofotométrica
computadorizada do marcador CD-34 no adenocarcinoma de cólon;
2. se ele apresenta alterações nas diferentes
fases evolutivas na classificação modificada de Dukes;
e 3. como se expressa quando localizado no cólon
direito e esquerdo.
MÉTODOS
O estudo foi realizado no Instituto de Pesquisas Médicas (IPEM) do Programa de
Pós-Graduação em Princípios da Cirurgia do Hospital
Universitário Evangélico de Curitiba / Faculdade Evangélica
do Paraná e no Laboratório de Citologia e
Histopatologia Ltda, de Curitiba. Esta pesquisa foi aprovada pelo
Comitê de Ética em Pesquisa da Sociedade
Evangélica Beneficente de Curitiba.
O material de estudo foi constituído por
amostras de peças de colectomias de 19 casos
de adenocarcinomas de cólon fixadas em formol e
conservadas em blocos de parafina. Este material foi
proveniente do arquivo do Serviço de Patologia do
Hospital das Forças Armadas de Brasília. Foram
também registrados o grau da classificação de Dukes (B ou
C) a que pertenciam, e o lado do cólon (direito ou
esquerdo) onde se localizavam.
Os 19 blocos foram re-examinados após novos cortes, e coloração hematoxilina-eosina foi
realizada por dois patologistas para confirmação
do laudo e avaliação da viabilidade do material a
ser submetido à imunoistoquímica (Figura 1).
Terminada a confecção das lâminas foi realizada a
análise quantitativa da imunoistoquímica,
utilizando-se o software IMMUNO®, sendo possível à
leitura de 19 lâminas. Foram estudados o índice de
marcação e a densidade óptica para determinar a
expressão do marcador.
Figura 1 - Exemplo de marcação imunoistoquímica do CD-34. |
ABSTRACT: Angiogenesis is considered to be one of the mechanisms responsible for the homeostatic balance among cells. During cell malignant degeneration, the unbalanced cell proliferation mechanisms demonstrate to be an important factor in cancer evolution and CD-34 is one important marker. Objective _ To evaluate CD-34 biomarker expression through cytophotometric analysis of colon adenocarcinoma samples; to verify the presence of tumor marker expression in different stages of tumor samples according to Dukes modified classification; to determine eventual difference in CD-34 expression while tumor location is either in right or left colon. Methods _ Nineteen samples were submitted to an immunohistochemical method, using anti-CD-34 monoclonal antibody. Marked slides were analyzed by SAMBA system using Immuno 4 software. Biomarker expression consisted in label index and optical density. The parameters considered under investigation were tumor expression, its intensity, correlations to Dukes' classification and tumor's side. Results _ The mean rate of CD-34 expression was 66.54, and optical density 43.60. Regarding Dukes' classification, 12 samples B-type presented label index 67.95 and optical density 43.21; seven C-type, label index was 64.12 and optical density 44.27. It was not possible to identify any difference related to Dukes' classification. Tumor side reflected significant difference in label index, but not in optical density. Eleven samples on the left presented 72.08 of label index and 46.70 of optical density. Eight right, demonstrated label index of 58.93 and optical density of 39.44. Conclusions _ CD-34 marker presented a low expression as an angiogenesis marker in colon tumors with no difference between Duke's tumors type-B and type-C. The tumor had higher angiogenic activity in the right than in left colon.
Key words: Colon cancer, Angiogenesis, CD-34, Immunohistochemistry.
Referências
1. Jemal A, Murray T, Ward E, Samuels A, Tiwari RC,
Ghafoor A, et al. Cancer statistics, 2005. CA Cancer J Clin. 2005
Jan-Feb;55(1):10-30.
2. Hanahan D, Folkman J. Patterns and emerging mechanisms
of the angiogenic switch during tumorigenesis. Cell. 1996
Aug 9;86(3):353-64.
3. Fox SB, Gasparini G, Harris AL. Angiogenesis:
pathological, prognostic, and growth-factor pathways and their link to
trial design and anticancer drugs. Lancet Oncol. 2001
May;2(5):278-89.
4. Huerta S, Goulet EJ, Livingston EH. Colon cancer
and apoptosis. Am J Surg. 2006 Apr;191(4):517-26.
5. Krause DS, Fackler MJ, Civin CI, May WS. CD-34:
structure, biology, and clinical utility. lood. 1996 Jan 1;87(1):1-13.
6. Goddard JC, Sutton CD, Furness PN, Kockelbergh
RC, O'Byrne KJ. A computer image analysis system for
microvessel density measurement in solid tumours. Angiogenesis.
2002;5(1-2):15-20.
7. Giorno R. A comparison of two immunoperoxidase
staining methods based on the avidin-biotin interaction.
Diagn Immunol. 1984;2(3):161-6.
8. Kiss R, de Launoit Y, Danguy A, Paridaens R, Pasteels
JL. Influence of pituitary grafts or prolactin administrations
on the hormone sensitivity of ovarian
hormone-independent mouse mammary MXT tumors. Cancer Res. 1989
Jun 1;49(11):2945-51..
9. Gasparin Jr P, Budel V, Petein M, Pasteels J, Kiss R.
DNA histogram typing and DNA index measurements in 508
invasive breast carcinomas from fine-needle aspirates and
imprint smears as opposed to formalin-fixed
paraffin-embedded tissues. Int. J. Oncology. 1994;5:589 -95.
10. Folkman J. Seminars in Medicine of the Beth Israel
Hospital, Boston. Clinical applications of research on angiogenesis.
N Engl J Med. 1995 Dec 28;333(26):1757-63.
11. Hanahan D, Weinberg RA. The hallmarks of cancer. Cell.
2000 Jan 7;100(1):57-70.
12. Weidner N, Semple JP, Welch WR, Folkman J.
Tumor angiogenesis and metastasiscorrelation in invasive
breast carcinoma. N Engl J Med. 1991 Jan 3;324(1):1-8.
13. Saclarides TJ. Novidades e controvérsias no tratamento
das doenças Clínicas Cirúrgicas da América do
Norte.Webmedicos 1997;1.
Endereço para correspondência:
João Batista Monteiro Tajra
Al. Augusto Stellfeld, 1980
CEP 80730-150
Bigorrilho - Curitiba - PR - Brasil.
Tel: (41) 32405488
E-mail: ipem@evangelico.org.br
Recebido em 28/08/2008
Aceito para publicação em 10/09/2008
Trabalho realizado no Instituto de Pesquisas Médicas do Hospital Universitário Evangélico de Curitiba / Faculdade Evangélica do
Paraná, Curitiba, Paraná, Brasil.
Fonte de auxílio: Hospital Universitário Evangélico de Curitiba / Faculdade Evangélica do Paraná, Curitiba, Paraná, Brasil e Demanda
Social CAPES.